Análisis enzimático cualitativo, Monografías, Ensayos de Bioquímica

¡Descarga Análisis enzimático cualitativo y más Monografías, Ensayos en PDF de Bioquímica solo en Docsity! ÍNDICE Introducción 01 Objetivos 02 Metodología 03 Resultados 04 Discusión 05 Conclusión 06 El estudio o investigación de una actividad enzimática involucra dos aspectos El método cualitativo consiste en poner de manifiesto la presencia de la enzima en estudio, , mediante la observación de la transformación del sustrato de la enzima, mediante reacciones que involucren un cambio de color, aparición de gas, cambio de pH, variación de viscosidad o de otro parámetro físico El método cuantitativo, consiste en determinar la cantidadde enzima presente en un sistema; para ello se recurre a la medida de la velocidad de la reacción catalizada por la enzima que se ensaya. En condiciones adecuadas, la velocidad de una reacción enzimática es directamente proporcional a la cantidadde enzima presente. En la presente práctica se están analizando los aspectos cualitativos de la ureasa y renina. En las plantas, la ureasa es un hexámero, y se encuentra en el citoplasma. En bacteria, consiste en dos o tres subunidades diferentes. Para su activación, la ureasa necesita unir dos iones de níquel por subunidad. La renina, también llamada angiotensinógenas, es una enzima implicada en el sistema de la aldosterona de la renina-angiotensina (RAAS) Regula el nivel del balance del agua y de presión arterial. El sistema regula el volumen extracelular en el plasma de sangre, la linfa y el líquido intersticial Metodología . 03 Experimento #1 EFECTO DEL CALOR SOBRE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS. "ACTIVIDAD DE LA UREASA" Experimento ¿+2 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE RENINA. Tubo Leche Oxalato de Amonio Solución renina SS Es [ Cloruro de Calcio Descripcion Color final (+,-) TUBO 1 Se calento el medio sin agua,solo la pura semilla de sandia con tapon de algodon Azul + TUBO 2 Se calento ya con agua destilada y sellado con tapón de algodon Verde amarille nto - TUBO 3 Se calento con agua pero sin estar sellado Azul + Resultados Resultados obtenidos despues Resultados obtenidos despues Tubo 2 y 3 despues de incubar por 10 minutos. de agregar 10 gotas de cloruro de agregar 10 gotas de calcio. de cloruro de calcio. Renina Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Resultados obtenidos despu es de incubar por 10 minutos. Sin solidificar (-) Presenta aglutinacion (+) Presenta aglutinacion (+) Resultados obtenidos despues de agregar 10 gotas de cloruro de calcio. Sin solidificar (-) Presenta aglutinacion(+) Presenta aglutinacion(+) • Oxalato de amonio 2% Al alcalinizar con amoníaco, por encima de pH 4, una solución ácida que contenga calcio y ácido oxálico (o algún oxalato soluble como el de sodio o de amonio), se produce la precipitación del calcio en forma de oxalato cálcico monohidratado, que es un polvo blanco, fino y poco soluble en agua fría. Se observa la aparición de 2 fases, una fase líquida, el suero, que contiene el calcio, y otra fase, con aspecto de sólido pastoso, que contiene el resto de los constituyentes de la leche (básicamente proteínas y grasas). El Oxalato de Calcio que ayuda a la formación de precipitado, es una molécula poco soluble lo que permite la formación del coágulo proteico. Discusión experimento 2 Solución de Rennina La renina o quimosina, es un complejo natural de enzimas proteolíticas cuya función biológica es la de coagular la leche en el estómago para facilitar su absorción. La quimosina actúa directamente en un punto delimitado de la caseína con calcio. Al alterar dicha molécula se inicia la formación de un gel que atrapa la mayoría de los componentes sólidos de la leche; este gel se contrae. La enzima actúa sobre el fosfocaseinato de calcio rompiendo enlaces peptídicos y transformándolo en fosfoparacasinato de calcio (inestable y muy sensible al calcio libre), lo que provoca la precipitación y formación del coagulo. Cloruro de calcio El cloruro de calcio brinda una fuente de iones de calcio que fomentan la precipitación de la proteína debido a la insolubilidad de estos iones, lo cual equilibra las interacciones electrostáticas entre proteína y enzima. Después de agregar la solución de renina a los tubos de ensayo y proporcionarles la temperatura adecuada en la incubadora, solo hacía falta incorporarles las gotas del cloruro de calcio a las soluciones 2 y 3, para que este junto al oxalato de amonio funcionaran como cofactores de la renina y la activaran para que empezara su actividad enzimática. Razón por la que el primer tubo no presento cuajo ya que no contaba con ninguno de los cofactores. Con el segundo tubo, se desnaturalizo su enzima al someterla a calor en el agua a punto de ebullición, por lo por lo que, al agregarle el cloruro de calcio, esta no pudo activar igual a la renina y no se formó la misma cantidad de coagulo que en la tercera solución. * Tx - Se manejó con tratamiento triple esquema a base de Omeprazol 20 mgs. 1 cápsula diaria antes del desayuno, Amoxicilina 500 mgs. cada 6 horas y Claritromicina 500 mgs. cada 12 horas por catorce días. - Cuatro semanas después la paciente se sintió bien y la prueba de aliento con carbono 13 fue negativa. S 6 .. 0% ae o S 6 a “Se obtuvieron los resultados esperados correctamente en ambos experimentos. * El motivo principal se basa en la observación de los efectos que se obtienen tras el cambio de temperatura en la actividad de las enzimas que actúan sobre distintos sustratos, por lo que estos tratan de encontrar la temperatura y medios óptimos para que se llevara a cabo la actividad enzimática. * Análisis enzimático cualitativo.