CREATININA CINETICA, Transcripciones de Química

¡Descarga CREATININA CINETICA y más Transcripciones en PDF de Química solo en Docsity! Método cinético para la determinación de creatinina en suero, plasma u orina Creatinina cinética AA LINEA LIQUIDA SIGNIFICACION CLINICA La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtración renal. Su determinación en suero, así como la depuración de creati- nina endógena constituyen parámetros importantes para el diagnóstico de diversas afecciones renales. FUNDAMENTOS DEL METODO La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reacción de Jaffe) produciendo un cromógeno rojo. La velocidad de esta reacción, bajo condiciones controladas, es una medida de la concentración de creatinina de la muestra puesto que se comporta como una reacción cinética de primer orden para la creatinina. Por otra parte, se ha demostrado que los cromógenos no-creatinina que interfieren en la mayor parte de las técnicas convencionales, reaccionan dentro de los 30 segundos de iniciada la reacción. De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reacción, el incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina. REACTIVOS PROVISTOS A. Reactivo A: solución de ácido pícrico 12,7 mmol/l y lau- rilsulfato de sodio 8,4 mmol/l. B. Reactivo B: solución de borato 53 mmol/l e hidróxido de sodio 970 mmol/l. S. Standard*: solución de creatinina 20 mg/l. REACTIVOS NO PROVISTOS Calibrador A plus de Wiener lab. INSTRUCCIONES PARA SU USO Reactivo A: listo para usar. A baja temperatura puede pre- sentar turbidez o sedimento. En tal caso, colocar en baño de agua a 37oC unos minutos antes de usar. Reactivo B: listo para usar. Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar cuatro partes de Reactivo A y una parte de Reacti- vo B. Rotular y fechar. A baja temperatura puede presentar turbidez o sedimento. En tal caso, colocar en baño de agua a 37oC unos minutos antes de usar. PRECAUCIONES El kit es para uso diagnóstico "in vitro". Reactivo B: corrosivo. H315 + H320: Provoca irritación cutánea y ocular. H314: Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y jabón abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/ máscara de protección. Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos: son estables a temperatura ambiente (menor a 25oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Reactivo de Trabajo: premezclado y en envase plástico, es estable una semana a temperatura ambiente. En analizadores automáticos que emplean Reactivo de Trabajo único (premezcla- do), referirse a las adaptaciones específicas de cada analizador. Evitar la exposición prolongada al aire, manteniendo el frasco bien tapado cuando no sea utilizado. MUESTRA Suero, plasma u orina a) Recolección: el suero o plasma se deben obtener de la manera usual. Puede emplearse también orina de 2 horas o de 24 horas. Su recolección debe efectuarse en un recipiente perfecta- mente limpio que se mantendrá en el refrigerador (2-10oC) durante el tiempo de la recolección. Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1:50 de la misma en agua destilada. En caso de que la diuresis sea de 2 horas, multiplicar el volumen medido por 12 para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas. b) Aditivos: en caso de utilizar plasma, recogerlo únicamen- te con heparina o EDTA. c) Sustancias interferentes conocidas: cuando la mues- tra es suero o plasma, no se observan interferencias por hemoglobina hasta 0,78 g/dl (7,8 g/l), triglicéridos hasta 1.700 mg/dl (17 g/l) ni bilirrubina hasta 24 mg/dl (240 mg/l); cuando la muestra es orina, no se observan interferencias por proteínas hasta 500 mg/dl (5 g/l), ácido ascórbico hasta 100 mg/dl (1 g/l) ni cetonas hasta 4 mmol/l. Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el suero o plasma debe ser separado de los glóbulos rojos antes de las dos horas de la extracción. Conservados en refrigerador (2-10oC) su estabilidad es de 3 días. * No provisto en todas las presentaciones C La orina puede mantenerse hasta 4 días en refrigerador (2- 10oC) sin agregado de conservantes. MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotómetro capaz de leer a 500 ± 10 nm. - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados. - Cubetas espectrofotométricas. - Baño de agua a 25oC. - Cronómetro. CONDICIONES DE REACCION - Longitud de onda: 500 nm - Temperatura de reacción: 25oC El control de la temperatura no es crítico, pudiendo oscilar entre 22 y 28oC. Ver Limitaciones del Procedimiento. - Volumen de muestra: 0,2 ml - Volumen de Reactivo de Trabajo: 1,2 ml - Volumen final de reacción: 1,4 ml PROCEDIMIENTO I- TECNICA PARA SUERO O PLASMA Equilibrar el Reactivo de Trabajo a la temperatura de reac- ción (25oC). Antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con agua destilada. En dos cubetas espectrofotomé- tricas marcadas S (Standard) y D (Desconocido), colocar: S D Reactivo de Trabajo 1,2 ml 1,2 ml Standard 0,2 ml - Muestra - 0,2 ml Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronómetro y proseguir la incubación. A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y D1) y continuar la incubación. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos después de la primera lectura). II- TECNICA PARA ORINA Recolectar y preparar la muestra como se describió en “Recolección”, efectuando una dilución 1:50 de la misma en agua desionizada. Aplicar luego la técnica I. CALCULO DE LOS RESULTADOS 1) Creatinina en suero (mg/l) = (D2 - D1) x f 20 mg/l f = S2 - S1 D2 - D1 2) Creatinina en orina (g/24 hs) = x V S2 - S1 siendo: V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 hs La fórmula surge de: D2 - D1 Creatinina en orina (g/24 hs) = x 0,020 g/l x 50 x V S2 - S1 donde: 0,020 g/l = concentración del Standard 50 = factor de dilución Para expresar la creatinina en orina en “mg/Kg/24 hs”: Creatinina en orina (g/24 hs) x 1000 mg/g Peso del paciente (Kg) 3) Depuración de Creatinina Endógena (D.C.E.): Creatinina en orina (g/24 hs) D.C.E. ml/min = x 694 ml/min Creatinina en suero (mg/l) donde: g/24 hs 1.000 mg x 1.000 ml 1.000.000 ml 694 ml/min = = = mg/l 1 mg x 1.440 min 1.440 min Para expresar D.C.E. en “ml/min/1,73 m2”: D.C.E. (ml/min) x 1,73 Superficie corporal del paciente (m2) METODO DE CONTROL DE CALIDAD Procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas de creatinina, con cada determinación. VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma: Hombre: 7 - 13 mg/l Mujer: 6 - 11 mg/l Orina: Hombre: 14 - 26 mg/Kg/24 hs Mujer: 11 - 20 mg/Kg/24 hs D.C.E.: Hombre: 94 - 140 ml/min/1,73 m2 Mujer: 72 - 110 ml/min/1,73 m2 Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI Creatinina (mg/l) x 8,84 = Creatinina (umol/l) LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Otras causas de resultados erróneos son: - Temperatura: si bien la temperatura de reacción admite una variación entre 22 y 28oC, una diferencia entre la temperatura de incubación del Standard respecto de las muestras disminuye la precisión del método. - Tiempo de lectura: ligeras variaciones en la medición del tiempo afectan notablemente la exactitud del método. Las lecturas deberán realizarse exactamente a los 30 segundos luego de haber mezclado la muestra con el reactivo y a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos luego de la primera lectura). PERFORMANCE a) Reproducibilidad: procesando de acuerdo al documento