Manejo seguro de ratas y ratones de laboratorio: bienestar animal y seguridad, Apuntes de Biofarmacia y Farmacocinética

¡Descarga Manejo seguro de ratas y ratones de laboratorio: bienestar animal y seguridad y más Apuntes en PDF de Biofarmacia y Farmacocinética solo en Docsity! Artículos originales Recomendaciones para manipulación y sujeción de ratas y ratones de laboratorio Ana Carolina Mourelle*, latg1, Emiliana Herrero, latg2, Micaela Ricca, latg3 1 Bioterio idehu-conicet, Universidad de Belgrano, Buenos Aires, Argentina 2 Bioterio icdme, Hospital Italiano de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina 3 Bioterio Central, Facultad Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile Recibido: 16 de mayo del 2013 Aprobado: 20 de noviembre del 2013 * Autor de correspondencia: Ana Carolina Mourelle, idehu-conicet, Junín 956 (1113), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina. Teléfono: 54 11 49648239 int. 119. Correo electrónico: carolinamourelle@conicet.gov.ar Cómo citar este artículo: Mourelle AC, Herrero E, Ricca M. Recomendaciones para manipulación y sujeción de ratas y ratones de laboratorio. Spei Domus. 2013; 9(19): 39-47. resumen. Cuando hablamos de experimentación con animales, generalmente se centra la atención en los protocolos de investigación, dejando de lado un tema fundamental que es el manejo de los sujetos experimentales. A fin de resaltar la importancia de esto último, nos hemos propuesto dar énfasis en las técnicas de manipulación y sujeción de ratas y ratones de laboratorio privilegiando el bienestar animal, la influencia en la investigación y la seguridad del personal. Palabras clave: bioterio, laboratorio, rata, ratón, roedores. Recommendations for Manipulation and Subjection of Laboratory Rats and Mice abstract. When we speak of experimentation with animals, we gene- rally focus on research protocols, leaving aside the fundamental matter of handling experimental subjects. To underline the importance of this aspect, we have chosen to emphasize techniques for manipulation and subjection of laboratory rats and mice, prioritizing animal welfare, its influence on research and on the safety of personnel. Keywords: bioterium, laboratory, rat, mouse, rodents. Recomendações para manipulação e sujeição de ratos e camundongos de laboratório resumo. Quando se fala de experimentação com animais, geralmente se centra a atenção nos protocolos de pesquisa e deixa-se de lado um tema fundamental que é o manejo dos sujeitos experimentais. A fim de ressal- tar a importância deste último, propusemo-nos enfatizar as técnicas de manipulação e sujeição de ratos e camundongos de laboratório, o que privilegia o bem-estar animal, a influência na pesquisa e na segurança do pessoal. Palavras-chave: biotério, laboratório, ratos, camundongos de laboratório, roedores. introducción Los animales de laboratorio están constantemente ex- puestos a procedimientos de rutina dentro de los bio- terios donde se alojan. Es sabido que estas rutinas de cambios de jaula, movimientos de sala en sala, entrada de personal, procedimientos de aseo, supervisión del estado de salud, toma de muestras, etcétera, alteran el estado de homeostasis, modificando variables fisioló- gicas y comportamentales. En el comportamiento de los animales de laborato- rio intervienen muchas variables, entre ellas el manejo diario y la aclimatación antes de un procedimiento que puede involucrar dolor o no. El impacto de los procedi- mientos de rutina en los animales es bien conocido y ha sido ampliamente publicado [1, 2]. Uno de los factores principales es el personal que los maneja. Los animales de laboratorio forman lazos emocionales y reconocen a las personas que usualmente los manejan, como también reaccionan ante situaciones y estímulos desconocidos y con los cuales no están familiarizados [3]; de allí la im- portancia de la aclimatación previa a los procedimientos. Siempre que el protocolo experimental lo permita, se recomienda fuertemente establecer sesiones de acos- tumbramiento al manipuleo de los animales previo al procedimiento experimental en sí. Esto sirve para que tanto el personal como los animales se habitúen tratan- do de minimizar situaciones de estrés e incomodidad de ambos [4]. 40 Artículos originales Spei Domus / Volumen 9, Número 19 / julio-diciembre 2013 Por otro lado, es importante destacar que los ani- males se comunican entre sí emitiendo ultrasonidos en frecuencias que los humanos no podemos oír [3], y si estamos realizando procedimientos o manipulaciones en una sala donde se alojan animales, notaremos que los últimos que trataremos estarán más alterados [2]. Debido a esto, se recomienda contar con un espacio se- parado de la sala donde se alojan para realizar procedi- mientos de manipulación y sujeción, por ejemplo para administrar una sustancia o tomar muestras, para evi- tar que todos los animales sientan el estrés de unos po- cos. Asimismo, si tenemos que trabajar con más de una jaula o un animal en particular, se debe tener la precau- ción de trasladar sólo la jaula o el animal que se mani- pulará al lugar del procedimiento [5]. Pero, ¿cómo se pueden predecir las preferencias de un animal? ¿Cómo saber si un animal reaccionará me- jor o peor ante ciertas formas de manipulación o ante ciertos procedimientos? Estos conocimientos se pue- den adquirir por publicaciones previas [6-8] y sobre todo por la experiencia y el entrenamiento adquiridos por el personal que trabaja a diario con los animales y aprenden a observarlos y a interpretar sus estados aní- micos, su salud y bienestar [9, 10]. Las técnicas de manipulación y sujeción son con- sideradas como no invasivas, pero el impacto de una mala técnica de manipulación y sujeción en los resul- tados experimentales puede ser significativo. La suge- rencia es no minimizar los métodos de manipulación y sujeción, porque es el principio de toda experimen- tación y del buen proceder en las maniobras. De estos procedimientos depende la respuesta de los animales y en definitiva la obtención de resultados válidos. consideraciones para tener en cuenta Escenarios Mirado desde una posición antropocentrista, sería válido extrapolar los resultados de una investigación en animales a humanos, entonces también sería lógi- co plantear que lo mejor para un humano en ciertas circunstancias pueda también ser lo mejor para los animales; y que un animal sentirá miedo y ansiedad ante situaciones similares a las que puede sentir miedo o ansiedad una persona. Por ejemplo, si un niño tie- ne que vacunarse, asistirá con miedo, principalmente porque es una situación desconocida. Mucho peor si delante de él ve salir llorando a otro niño que pasó por lo mismo minutos antes. El niño no tiene la voluntad propia de colaborar o si intenta tenerla de todas for- mas lo vence la angustia y el miedo al elemento filoso y amenazante que le muestra una persona desconocida. Su único consuelo es que su madre lo acompañe y, si ella le asegura que nada le pasará, el niño se sentirá un poco más reconfortado. Incluso la próxima vez que concurra al vacunatorio tendrá una experiencia me- nos aterradora. En este contexto, una persona adulta sobreviene la situación en forma diferente. Si bien pue- de experimentar alguna mínima sensación de miedo o ansiedad, posiblemente colabore voluntariamente con el enfermero, así el procedimiento se realizará rápido y “limpio” y eso será beneficioso tanto para el enfermero como para la persona. Extrapolando estas situaciones a los animales, po- dríamos decir que un animal, que desde su nacimien- to fue confinado a un ambiente silencioso, controlado hasta en los más mínimos detalles y con mínimas per- turbaciones, emocionalmente se sentirá inseguro, con angustia, miedo y estrés cuando su rutina diaria se al- tere a causa de una técnica mal aplicada de manipula- ción o sujeción [11]. Con esto queremos recalcar la importancia de lo- grar un clima de trabajo en el que los animales se sien- tan cómodos, contenidos, y que de preferencia no sea una mano y voz desconocida o un olor extraño quien lo acompañe al momento de realizarse un procedimien- to experimental. En el caso de cirugías o procedimien- tos más complejos, ese entorno conocido debería estar presente hasta que el animal haya sido anestesiado y de preferencia ser el mismo cuando recobre la conciencia. Lógicamente hay procedimientos en los que esta prác- tica puede ser difícil de cumplir, pero siempre es posi- ble mejorar los procedimientos. Algunos ejemplos: que el técnico cuidador sea quien sujete al animal y lo cal- me luego del procedimiento; que el animal sea trasla- dado en una jaula que le resulte familiar, con el mismo lecho que usa a diario; que la temperatura ambiental del laboratorio sea la misma de la sala de los animales. En definitiva, cuanto mejor esté el animal mejor serán los resultados científicos que pueda brindar. Históricamente, los antecesores de ratas y ratones han tenido mala reputación entre la población humana, sobre todo por haber sido portadores de patógenos que han afectado gravemente a la humanidad. Hoy en día contamos con ratas y ratones de laboratorio que son ani- males creados y criados en condiciones de confinamien- to desde 1900; su comportamiento ha sido domesticado, en la actualidad son dóciles y, por lo general, se relacio- 43Recomendaciones para manipulación y sujeción de ratas y ratones de laboratorio Inmovilización de ratones Una vez sujeto el animal por la parte proximal de la cola, se debe colocar sobre una superficie rugosa donde se pueda sujetar con sus patas delanteras. Este proceso lo haremos con la mano diestra. A su vez, con la otra mano tomaremos la piel del dorso inmediatamente detrás de las orejas con los dedos índice y pulgar, sin ejercer de- masiada presión, pero firme. Tomar suficiente piel de manera firme para inmovilizar al animal (figuras 6 y 7). Para impedir que el animal se lesione durante el procedimiento de inmovilización, se evitará aplicar de- masiada tensión en el área del cuello al tomar la piel del dorso. Esto podría disminuir la circulación y respi- ración del animal, resultando en la muerte. Supervisar constantemente la coloración de la piel, mucosa y len- gua durante la sujeción, evitando que el animal tome un tono azulado (cianosis). figura 6. Inmovilización de ratón adulto Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 7. Otra vista de la inmovilización de ratón adulto Fuente: Aula Virtual Bioterio Manejo de ratas Las ratas de laboratorio son menos inquietas que los ratones. Realizan movimientos más lentos pero son más fuertes que los ratones. Los machos adultos suelen intimidar a muchos investigadores por su tamaño; sin embargo, estos animales suelen ser muy dóciles cuan- do están acostumbrados a la manipulación. Existen hoy en día bioterios que reportan tener animales agresivos. Estos problemas de agresividad o rechazo al contacto con el personal, generalmente, es- tán asociados con algún problema ambiental, como puede ser el ruido excesivo, el hacinamiento o la falta de higiene de las jaulas. Además de los factores ambien- tales mencionados, los animales reaccionan de manera negativa a la manipulación cuando no están familiari- zados con el personal a cargo, más aún cuando se les toma por la cola para cambiarlos de una jaula a la otra, o cuando su alojamiento se realiza en jaulas con piso de reja aunque sea de manera temporal, lo que, además de la incomodidad, implica que los animales no son ma- nipulados frecuentemente. Es importante entonces co- menzar a refinar todos estos procedimientos desde el mismo momento en que nacen los animales. Para manipular ratas preñadas o animales gran- des también se debe tener la precaución de abordarlas en forma suave (figura 8). Para tomarlas se envolverá con una mano desde el dorso del animal hacia el vien- tre (figura 9), dándole soporte con toda la palma de la mano (figura 10). Las crías de rata se manejan de forma similar a las crías de los ratones, evitando, en lo posible, su mani- pulación durante los primeros dos o tres días de vida, sobre todo si la hembra es primeriza. Los días siguien- tes pueden cambiarse para la limpieza de las jaulas, to- mando el grupo de crías junto con parte del nido, o bien pasándolas una a una hacia la otra jaula (figuras 11 y 12). Si los animales no están habituados al perso- nal, es mejor pasar primero a la hembra, luego un poco del nido de la jaula sucia y, por último, las crías. Cuan- do las crías tienen entre 10 y 18 días de edad, pasan una etapa en la que son muy movedizas y hay que te- ner cuidado con los accidentes; se deben sostener sin apretarlas, pero con la firmeza suficiente para restrin- gir sus movimientos. Cuando las ratas están cercanas al destete se re- comienda tomarlas como animales adultos (figura 13). Los animales deben seguir siendo manipulados fre- cuentemente, como mínimo las veces que se les reali- za el cambio de jaula, tomándolos por el lomo o por su vientre, con la palma de la mano. 44 Artículos originales Spei Domus / Volumen 9, Número 19 / julio-diciembre 2013 figura 8. Acercamiento a las ratas previa manipulación Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 9. Manipulación de rata adulta Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 10. Manipulación de rata adulta Fuente: Aula Virtual Bioterio figuras 11. Manipulación de crías de tres días Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 12. Manipulación de crías de tres días en forma individual Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 13. Toma de ratas de 21 días de edad Fuente: Aula Virtual Bioterio Inmovilización de ratas Para realizar ciertos procedimientos puede ser necesa- rio inmovilizar al animal. Inmovilizar no es sinónimo de forzar ni de apretar con fuerza al animal. Inmovilizar físicamente a una rata de laboratorio significa restringir sus movimientos, poner una barrera, en este caso física, que impida al animal moverse. Existen diferentes ma- niobras de sujeción para ratas de laboratorio, y se debe evaluar y elegir para cada situación en particular cuál es conveniente utilizar, teniendo en cuenta dos aspectos: primero, que la maniobra elegida deje expuesto el acce- so a la parte del cuerpo del animal en el que se precisa trabajar; y segundo, la habilidad, seguridad y preferencia del técnico que va a realizar la sujeción. Las primeras maniobras consisten en tomar a la rata con la mano hábil por el tórax de forma envolvente —igual que se la toma diariamente para realizar el cambio de le- chos—, pero colocando los dedos de la mano que sujeta al animal en diferentes lugares estratégicos que impedirán al animal mover su cabeza y sus patas delanteras. Las ratas de hasta 150 gramos de peso pueden tomarse empleando una sola mano (figuras 14 y 15), pero para las ratas más grandes se precisará utilizar ambas manos. En este último 45Recomendaciones para manipulación y sujeción de ratas y ratones de laboratorio caso, con la mano libre se da apoyo a los cuartos traseros del animal al mismo tiempo que se sostienen las patas tra- seras y la cola, impidiendo sus movimientos (figuras 16 y 17). Es importante recordar entonces que para ratas de más de 150 gramos debe haber dos operarios, uno para sujetar al animal y otro para realizar el procedimiento ex- perimental. Estas maniobras son bien aceptadas por las ratas que generalmente no oponen resistencia. figura 14. Inmovilización de rata de menos 150 gramos de peso Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 15. Inmovilización de rata de menos 150 gramos de peso Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 16. Inmovilización de ratas adultas de más de 150 gramos de peso Fuente: Aula Virtual Bioterio figura 17. Inmovilización de ratas adultas de más de 150 gramos de peso Fuente: Aula Virtual Bioterio La siguiente maniobra de sujeción es conocida con el nombre de “pinzamiento”, y es una adaptación a la técnica utilizada en ratones. Para realizar esta técni- ca se recomienda tener sesiones de manipulación sua- ve con frecuencia diaria [15]. La ventaja de esta técnica es que permite la exposición y acceso a otras áreas del cuerpo; para ello el personal toma con su mano há- bil un pliegue de piel del dorso de la rata (figura 18), iniciando el pinzamiento en la piel de la nuca con los dedos índice y pulgar (figura 19) y continuando con el resto de la mano hacia la piel del dorso hacia cau- dal. Nuevamente, si es una rata de más de 150 gramos, será necesario dar apoyo con la mano libre a los cuar- tos traseros para completar la técnica de inmoviliza- ción (figura 20). figura 18. Técnica de inmovilización por pinzamiento. Inicio de la toma de la piel dorsal del animal Fuente: Aula Virtual Bioterio