Evaluación de fuentes alternativas de peptona de soja para el crecimiento bacteriano, Monografías, Ensayos de Microbiología

¡Descarga Evaluación de fuentes alternativas de peptona de soja para el crecimiento bacteriano y más Monografías, Ensayos en PDF de Microbiología solo en Docsity! “Evaluación de fuentes de peptona de soja alternativas para el crecimiento bacteriano”. Nombre Alumno: Marcela Rojas Berrios. Profesor Tutor: Rodrigo Morales Vera. Ph. D Profesor Supervisor: Dra. Karla Quiroz. Fecha de entrega: 07.07.2022 1 Agradecimientos. A la guía de Javiera Herrera por su gran ayuda y colaboración en cada momento de consulta y soporte en este trabajo de investigación. Así mismo, agradezco a David Vergara por sus constantes palabras de apoyo personal y humano. Finalmente, al laboratorio de docencia de la escuela de ingeniería en biotecnología de los Recursos Naturales de la Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales por el apoyo financiero. Introducción. El poroto de soja está considerado como una importante fuente de proteína de origen vegetal. Ello se debe a su alto contenido de proteína, superior al de otras especies vegetales debido a su alto contenido en aminoácidos esenciales aproximándose a la proteína de origen animal. Así mismo, posee un alto contenido de vitaminas del grupo B, grupo K, hierro, potasio y calcio (1). La Peptona de Soja se obtiene a través de la digestión enzimática controlada de la proteína de soja, garantizando bajos niveles de endotoxinas (2). La cual se utiliza comúnmente como base nutritiva para el cultivo de los microorganismos, facilitando el crecimiento rápido y profuso, además de su capacidad de producir reanimación en microorganismos lesionados de forma reversible. Aunque se debe considerar que su alto contenido en azúcares fermentables hace que la peptona de soja sea inadecuada en estudios de fermentación, como por ejemplo, en medios utilizados para la identificación de microorganismos sobre la base de fermentación de azúcar (1). La peptona de soja se puede encontrar a la venta en la sección de materiales aptos para microbiología como “Peptona de harina de soja” o “Peptone from soymeal”, CAS 91079-46-8, posee un valor que ronda los $88.100 CLP (3). Si bien el alto costo monetario es un factor estimable, además es considerado como un producto escaso, debido a que se encuentra agotado en diferentes plataformas de venta. Por lo tanto, la obtención de peptona de soja a partir de diferentes fuentes alternativas se presenta como una posible solución a la problemática de escasez del producto. Por otro lado, referente al crecimiento bacteriano se puede describir utilizando métodos gráficos donde se muestra el aumento del número de células en un cultivo (graficado en escala logarítmica) por unidad de tiempo. Generalmente, las bacterias crecidas experimentalmente exhiben un patrón de crecimiento similar. En donde se distinguen varias etapas o fases, características (4). Fig.1. Curva típica de crecimiento de una población de microorganismos. 2 Gráfico 2. Curva Estándar de Crecimiento Microbiano de Pseudomonas putida durante 7 horas de incubación en tres medios de cultivo, donde el medio 1 fue elaborado con peptona de soja (convencional), medio 2 con pasta de soja (alternativo) y el medio 3 con agua de cocción del poroto de soja (alternativo). Gráfico 3. Curva Estándar de Crecimiento Microbiano de Rhodococcus rhodochrous durante 7 horas de incubación en tres medios de cultivo, donde el medio 1 fue elaborado con peptona 5 de soja (convencional), medio 2 con pasta de soja (alternativo) y el medio 3 con agua de cocción del poroto de soja (alternativo). Discusión Las cepas de bacterias analizadas poseen condiciones de cultivo similares entre sí. Bacillus cereus es un bacilo Gram positivo, anaerobio facultativo y móvil debido a la presencia de flagelos perítricos, es resistente a condiciones adversas, como altas temperaturas, deshidratación y radiación. Es capaz de crecer en un amplio rango de temperaturas, desde los 4 °C a 48 °C y soporta concentraciones de NaCl en el medio hasta del 7 % (6). Pseudomonas putida se caracteriza por ser un bacilo Gram negativo aerobio. Es un microorganismo altamente versátil, capaz de tolerar condiciones bajas de oxígeno. Puede sobrevivir con bajos niveles de nutrientes y crecer bien a temperaturas entre 28 y 30°C (7). Rhodococcus rhodochrous agrupa formas bacilares y cocoidales, pudiendo llegar a formar filamentos vegetativo ramificados. Es una bacteria Gram-positiva, parcialmente alcohol-ácido-resistente y aeróbica. No móvil, crece bien a temperaturas de 30 a 37°C y crece en la mayoría de los medios comunes de uso en el laboratorio (8). Luego de 7 hrs de cultivo a 30°C, se puede observar en las gráficas 1, 2 y 3 que las curvas aumentaron su pendiente, por esta razón se puede decir que si hubo un crecimiento de las colonias de bacterias (9), sin embargo, no de manera constante, para las curvas correspondientes al medio 2 y 3. La curva correspondiente al medio 1 fue considerada como grupo control, la cual presenta peptona de soja de manera convencional. Por otro lado, el medio 2 contiene pasta de poroto de soja en las mismas proporciones que el medio 1 contiene peptona de soja (5 g). Su curva presenta el mayor crecimiento bacteriano en comparación a los otros medios evaluados. Sin embargo, no de forma estable en el tiempo, ya que para el t=3 las cepas Bacillus Cereus, Pseudomonas putida y Rhodococcus rhodochrous presentan un decrecimiento, que se restablece a la hora siguiente t=4, no obstante, la cepa Rhodococcus rhodochrous presenta nuevamente un decrecimiento en la curva para t=6, reanudando en t=7. Esto se puede deber a factores como agotamiento de nutrientes o por la acumulación de productos del mismo metabolismo microbiano, que les son tóxicos a la población microbiana (9) pero, dado que el crecimiento no llega a disminuir hasta detenerse, un fallo en el lector del spectroquant Pharo 300 puede ser un factor para los decrecimientos en las curvas, en donde la vida útil es de flash, corresponde a un mínimo de 13000 h5 × 108 en funcionamiento ininterrumpido (10). Del mismo modo, el medio 3, constituido de agua de cocción del poroto, preparada con agua potable, es por ello que se considerando un contenido adicional de sodio, potasio, calcio, magnesio, cloro, azufre y fósforo en concentraciones no informadas (11). De igual forma el medio 3 presentó un crecimiento bacteriano, sin embargo, para t=6 las bacterias Bacillus Cereus, Pseudomonas putida y Rhodococcus rhodochrous presentaron un leve decrecimiento reanudando en t=7. 6 Conclusión Al realizar las mediciones en el espectrofotómetro Spectroquant Pharo 300 en distintos tiempos, los valores de las absorbancias no cambiaron en gran medida. Asumiendo que Bacillus Cereus, Pseudomonas putida y Rhodococcus rhodochrous, adaptaron su equipo enzimático a los medios de cultivos estudiados, puesto que presentaron disminuciones en algunos puntos de la gráfica, los cuales se restituyeron a la hora siguiente de cada medida. En donde el factor de error de mayor probabilidad se deduce que puede ser por la disminución de la vida útil del Spectroquant Pharo 300. Pese a los decaimientos en las curvas de los medios 2 y 3. El medio que obtuvo un mayor crecimiento bacteriano fue el número 2 actuando de manera eficiente para las tres cepas bacterianas analizadas. Finalmente se puede decir que la concentración de cada reactivo empleado y los componentes de este son puntos claves para el estudio eficaz de cultivos de microorganismos. Anexos. Anexo 1. Tabla de valores de densidad óptica y desviación estándar del crecimiento bacteriano analizado durante 7 horas de incubación de la alícuota de Bacillus cereus con una absorbancia medida a 600nm. Anexo 2. Tabla de valores de densidad óptica y desviación estándar del crecimiento bacteriano analizado durante 7 horas de incubación de la alícuota de Pseudomonas putida con una absorbancia medida a 600nm. 7