Reporte de practica 2, Guías, Proyectos, Investigaciones de Bioquímica

¡Descarga Reporte de practica 2 y más Guías, Proyectos, Investigaciones en PDF de Bioquímica solo en Docsity! DETERMINACIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN EN LA REGIÓN VISIBLE DE UN COLORANTE SAMARA JIMENEZ LOPEZ 214703721 PROFESOR SANDRA FABIOLA VELASCO RAMIREZ OBJETIVO GENERAL En esta práctica se tiene como objetivo el conocer cómo usar el espectrofotómetro y como utilizar los datos que este arroja. Además, aplicar la espectrofotometría como una técnica cualitativa y cuantitativa de análisis. OBJETIVOS ESPECIFICOS  El estudiante adquiera habilidades en el manejo del espectrofotómetro  Dominar los criterios para la selección de la longitud de onda adecuada en la cuantificación de Realizar los cálculos teóricos mediante la aplicación de fórmulas o factores de conversión para en la práctica preparar soluciones liquidas aplicando normas de bioseguridad, utilizando correctamente materiales y equipos en el laboratorio.  Analizar conceptos relacionados con la espectrofotometría para entender su importancia como técnica de análisis bioquímico. FUNDAMENTOS TEORICOS Los métodos espectroscópicos de análisis están basados en la medida de la radiación electromagnética que es absorbida o emitida por una sustancia. En función de ello se clasifican fundamentalmente en: a) Prepare una dilución de las siguientes diluciones: 1/10, a partir de las diluciones madres y agua destilada. Mezclar bien y proceda a leer en el espectrofotómetro como se indica a continuación: 1. Encender el aparato y dejarlo calentar de 5 a 10 minutos. 2. Seleccionar la longitud de onda adecuada 3. Calibrar el aparato de 0% de absorbancia b) La dilución se somete a lecturas contra el blanco de agua destilada, variando cada vez la longitud de onda de 20 unidades, iniciando la lectura en 400 nm y finalizando en 700nm (espectro visible). Se anotan las lecturas correspondientes a cada longitud de onda y se grafican los valores de la longitud de onda de las abscisas y la absorbancia o el % de transmitancia en la ordenada, en papel milimétrico. RESULTADOS AZUL DE BROMOFENOL •Se anotan las lecturas correspondientes a cada longitud de onda y se grafican 4 •La dilución se somete a lecturas contra el blanco de agua destilada, variando cada vez la longitud de onda de 20 unidades, iniciando la lectura en 400 nm y finalizando en 700nm 3 •Encender el aparato y dejarlo calentar de 5 a 10 minutos. •Seleccionar la longitud de onda adecuada •Calibrar el aparato de 0% de absorbancia 2 •Se preparo una dilución de las siguientes diluciones: 1/10, a partir de las diluciones madres y agua destilada •Mezclar bien y proceda a leer en el espectrofotómetro 1 ABSORBANCIA longitud de onda (λ) TUBO 400 420 440 460 480 500 520 540 A 0.08 3 0.03 3 0.03 2 0.05 2 0.08 4 0.14 3 0.24 5 0.40 5 longitud de onda (λ) 560 580 600 620 640 660 680 700 B 0.61 0 0.95 7 0.95 0 0.23 6 0.03 6 0.00 6 0.00 2 0.00 1 El punto máximo de absorción para el tubo A =0.405 a 540 nm y para el tubo B =0.957 a 580 nm. ANARANJADO DE METIL El punto máximo de absorción que se muestra en la grafica anteriores para el tubo A=0.766 a 460 nm y para el tubo B=0.021 a 560 nm. ABSORBANCIA longitud de onda (λ) TUBO 400 420 440 460 480 500 520 540 A 0.44 2 0.58 5 0.69 1 0.76 6 0.71 9 0.51 8 0.26 1 0.09 6 longitud de onda (λ) 560 580 600 620 640 660 680 700 B 0.02 1 0.00 9 0.01 1 0.01 1 0.01 4 0.01 1 0.01 1 0.01 1 y = 0.0022x - 0.8946 R² = 0.6812 -0.05 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0 100 200 300 400 500 600 Tubo A y = -0.0027x + 1.7989 R² = 0.3277 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 100 200 300 400 500 600 Tubo A CONCLUSION A través de la técnica de espectrofotometría de UV-VIS se determino la absorvancia de dos sustancias, azul de bromofenol y anaranjado de metilo. Para el tubo A=0.405 a 540 nm y B=0.957 a 580 nm, para el Tubo A= 0.766 a 460nm y B=0.021 a 560 nm respectivamente. CUESTIONARIO 1.- En que se basa la espectrofotometría. El principio de funcionamiento de la espectrofotometría se basa en el empleo de las interacciones entre la radiación electromagnética y la materia. 2.- Enuncie el fundamento de la ley de Lambert-Beer. “La intensidad de un haz de luz monocromática, que incide perpendicular sobre una muestra, decrece exponencialmente con la concentración de la muestra”, según esta ley : A = K.C. usada, de la sustancia que se analiza y del espesor de la celda usada. 3.- ¿Cuáles son las características de la luz? Se propaga en línea recta. Se refleja cuando llega a una superficie reflectante. Cambia de dirección cuando pasa de un medio a otro (se refracta 4.- Mencione cuatro componentes del espectrofotómetro y explique su función. Un espectrometro tipico posee cuatro componentes basicos: una fuente de radiacion que tiene intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre ( usualmente es lampara de tungsteno para luz visible,y deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la muestra, un monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la muestra, y un fotodetector, que mide cuantitativamente la radiacion que pasa por la muestra. 5.- ¿Qué es una curva de calibración? Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de una sustancia (por ejemplo la albúmina sérica bovina que vimos antes) que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia (proteínas) presente en una muestra incógnita. 6.- Mencione los pasos para el manejo del espectrofotómetro. 1. Seleccionar el modo (A = absorbancia, %T = %transmitancia, C = concentración) y la longitud de onda ( ). 2. Medir el blanco. 3. Introducir el valor del estándar o el factor (modo concentración únicamente). 4. Medir las muestras.