Resumen de cultivo celular, Resúmenes de Hematología

¡Descarga Resumen de cultivo celular y más Resúmenes en PDF de Hematología solo en Docsity! SEMINARIO Nº1. CULTIVO CELULAR - Hematología I Microbiología y bioanálisis Universidad Industrial De Santander Astrid Camila Martinez 2191620, Angélica María Sarmiento Sanchez 2190946, Santiago Picón Ojeda 2191852, Natalia Correa Lizarazo 2172738. HISTORIA A finales del siglo XIX se inicia el cultivo de células in vitro para desarrollar órganos de diferentes animales y durante el inicio del siglo XX se empieza a estudiar la forma de tener un cultivo de células adecuado y duradero. En 1913, Carrel demostró la forma de mantener un cultivo de células por muchos años, hasta los años 40 se implementan diversas técnicas de obtención de cultivo y mantenimiento de las condiciones; a partir de esta década se desarrollan diversas aplicaciones del cultivo celular, como la producción de medicamentos a gran escala y la ingeniería de tejidos. Se entiende por CULTIVO CELULAR, al conjunto de técnicas que nos permiten aislar, crecer, mantener y reproducir de manera In vitro células de origen animal o vegetal manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. FUNDAMENTO Las células aisladas de un tejido donante, pueden sobrevivir, mantenerse y multiplicarse in vitro de distintas maneras, bien sea de forma espontánea o con ayuda de medios mecánicos y diversas técnicas que conservan al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. BIOLOGÍA DE LOS CULTIVOS CELULARES El ambiente in vitro favorece la migración, proliferación y diferenciación de células no especializadas, también está influenciado por el sustrato, el medio y la temperatura. La adhesión celular está dada por CAMs, cadherinas, integrinas y proteoglicanos que trabajan en conjunto con el citoesqueleto. En la proliferación participan proteínas supresoras de tumores (p53 y Rb) y la diferenciación necesita de una alta densidad celular, las interacciones célula-célula y célula-matriz, y la presencia de factores de diferenciación, estos procesos son antagónicos. La señalización celular en cultivo solo cuenta con señales autocrinas y paracrinas, actúan como factores de crecimiento en concentraciones adecuadas y actúan como factores de diferenciación. TIPOS DE CULTIVO CELULAR 1. Cultivo de órganos Este tipo de cultivo permite mantener la arquitectura de los tejidos in vivo por ende conserva los tejidos histológicos y mantiene los tipos celulares diferenciados. 2. Cultivo primario Los cultivos primarios están constituidos por células que han sido aisladas de un tejido y que proliferan en las condiciones apropiadas, estas células al crecer y multiplicarse, consumen nutrientes y cada cierto tiempo deben ser divididas en subcultivos, los cuales suelen mantener la mayoría de las características de los tejidos de los que se derivan. Los cultivos primarios pueden presentar 2 tipos de crecimiento: Crecimiento en monocapa o en suspensión. El crecimiento en monocapa consiste en la producción de células in vitro adheridas a un soporte, es decir anclaje-dependientes, mientras que el cultivo en suspensión consiste en la producción de células dispersas en el medio de cultivo. 3. Explantes primarios Un explante es un tejido vivo que se separa del órgano, el cual puede ser cultivado en un medio específico, el cual suele estar compuesto principalmente por plasma coagulado y extracto embrionario. 4. Cultivo histotípico y organotípico SEMINARIO Nº1. CULTIVO CELULAR - Hematología I Microbiología y bioanálisis Universidad Industrial De Santander Son cultivos cuyo propósito es la creación in vitro de órganos o tejidos, los cuales sean fisiológicamente funcionales. METODOS Y PARAMETROS La metodología que se utiliza para la mayoría de líneas celulares tienen un inicio como cultivo primario que se origina a partir de un trozo de tejido picado o dispersado con el uso de enzimas, luego de un periodo de tiempo, este cultivo alcanza la confluencia, y ya en este punto se necesita desagregar el cultivo usando enzimas como la tripsina, al realizar el primer pase el cultivo adquiere la denominación de línea celular. Las líneas celulares diploides no progresan más allá de unas pocas duplicaciones de población, por lo que su capacidad replicativa es finita y comienza a ralentizarse y finalmente se dejan de dividir, en cambio las líneas celulares continuas o inmortalizadas cuentan con una capacidad replicativa infinita, muchas de estas líneas se derivaron de tejido tumoral. Las células cuentan con diferentes velocidades en cada una de las etapas de crecimiento, en la fase exponencial de crecimiento la velocidad es bastante constante y reproducible, garantizando viabilidad, estabilidad genética y fenotípica al momento de realizar algún tipo de estimación o para realizar un subcultivo o pase. Para el control de las tasas de crecimiento los recuentos celulares son necesarios, para este fin se usan los hemocitómetros que permiten estimar el número de células y la viabilidad celular. Hay otros parámetros que se deben revisar con regularidad en el cultivo, como lo son las evidencias macroscópicas de contaminación, cambios inusuales de pH, turbidez, partículas y presencia de pequeñas colonias de hongos en la interfaz de aire-medio. Los medios de cultivo celular son mezclas de sales, carbohidratos, vitaminas, aminoácidos, precursores metabólicos, factores de crecimiento, hormonas y oligoelementos generando un medio con los requerimientos nutricionales adecuados, además de mantener el pH y la osmolaridad en el sistema. El medio esencial mínimo de Eagle (EMEM), fue desarrollado a partir de un medio más simple formulado para cultivar células L de ratón, este medio fue uno de los primeros en ser usado. Los medios de cultivo completos que son específicos de alguna línea celular necesitan suplementos adicionales que no están presentes en el medio base. UTILIDAD INVESTIGATIVA Técnica usada en áreas de investigación y aplicación como: → Investigación básica: • Actividad intracelular: transcripción de DNA. • Flujo intracelular de biomoléculas: procesamiento del ARN. • Genómica y proteómica: análisis genético. • Ecología celular: el estudio de las condiciones ambientales responsables del mantenimiento de la funcionalidad celular y de su diferenciación. • Las interacciones celulares: morfogénesis. → Investigación aplicada: • Virología: Cultivo de virus animales y de plantas. • Biotecnología: producción industrial de fármacos en biorreactores. • Inmunología. Producción de anticuerpos monoclonales. • Farmacología: Efecto de diversos fármacos. • Ingeniería de tejidos. Producción de tejidos artificiales (piel, cartílagos) para el tratamiento de grandes quemaduras. • Toxicología: citotoxicidad