Biología Molecular del VIH y Desarrollo de Inhibidores para el SIDA, Diapositivas de Microbiología

¡Descarga Biología Molecular del VIH y Desarrollo de Inhibidores para el SIDA y más Diapositivas en PDF de Microbiología solo en Docsity! VIH/SIDA OGÍA MOLECULAR Y Departamento de Bioin Química Fí Centro de Ingeniería Genéti Personas viviendo con VIH/SIDA Total 33.2 millone o Adultos 30.8 millo - Mujeres 15.4 millone -— Niños 2.5 millones ONUSIDA 2007 Objetivos onocer los eventos históricos que llevaron al imiento del VIH y su relación con el SIDA Conocer la printipales características del VIH: composición, tropismo, s y proteínas y funciones Conocer el ciclo replicativo d Conocer los principios de antiretrovirales y la situación act en este campo. F. BARRÉ-SINOUSSI, J. C. CHERMANN F. Rey, M. T. NUGEYRE S. CHAMARET, J. GRUEST C. DAUGUET, C. AXLER-BLIN Institur Pasteur, Département de Virologie, 75724 Paris Cédex 15 F. VÉZINET-BRUN, C. ROUZIOUX Hópital Claude Bernard, Laboratoire Central —Virologie, 10 avenue de la Porte d'Aubervilliers, 75019 Paris W. ROzZENBAUM Hópital La Pitié-Salpétriere, Département de Santé Publique et Médecine Tropicale, 97 Boulevard de l' Hópital 73013 Paris L. MONTAGNIER Institut Pasteur, Departement de Virologie, 75724 Paris Cédex 15 SCIENCE, VOL. 220 : 5.0 A A Á — 26+ [BH]uridine (10? x count/min) o , T o 5 10 Fractions + s o , + S a - DESCUBRIMIENTO DEI VIH Reverse transcriptase activity (10% x count/m Isolation of a T-Lymphotropic Retrovirus from a Patient at Risk for Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) Abstract. A retrovirus belonging to the family of recently discovered human T-cell leukemia viruses (HTLV), but clearly distinct from each previous isolate, has been isolated from a Caucasian patient with signs and symptoms ihat often precede the acquired immune deficiency syndrome (AIDS). This virus is a typical type-C RÑA tumor virus, buds from the cell membrane, prefers magnesium for reverse transcrip-. tase activity, and has an internal antigen (p25) similar to HTLV p24. Antibodies from serum of this patient react with proteins from viruses of the HTLV-I subgroup, but bype-specific antisera to HTLV-I do not precipitate proteins of the new isolate. The virus from this patient has been transmitted into cord blood lymphocytes, and the virus produced by these cells is similar to the original isolate. From these studies itis concluded that this virus as well as the previous HTLV isolates belong to a general family of T-lymphotropic retroviruses that are horizontally transmitted in humans and may be involved in several pathological syndromes, including ATDS., 80 E” 40% o 2 o 2 o 3 Mm 20 o MIKULAS PorovIc Laboratory of Famor Coli Biology, National Cancer Instituse, Bethesda, Maryland 20203 GENE M. SHEARER Imenunology Branch, National Cancer Institute Marx KarLar Division of infections Diseases. North Shore University Hospital, Manhusser, New York 11030 Barton F. Haynes Thomas . PALKER Department af Medicine, Duke University School of Medicine, Durham, North Carolina 23710 RoBERT REOFIELD: Depariment of Virus Diseases. Walter Reed Army lastre of Research, Washingien, D.C. 20012 James OLesKkE Division of Allergy, Immunology, and Infectious Disease, University of. Medicine and Dentistry af New Jersey, Newark 07103 BLAN SAFAI Dermatolagy Service, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, New York 10021 GueerT Wirre Paul Foster Depariment of Medicine, University of. North Carolina, Chapel Hill 27314 Phunteir D. Mariam Depariment of Cell Biology. Lion Rioneties, Inc Kensingron, Maryland 20595 ii EIA DESCUBRIMIENTO DEl VIH Detection, Isolation, and Continuous Production of Cytopathic Retroviruses (HTLV-I) from Patients with AIDS and Pre-AIDS Frequent Detection and Isolation of Cytopathic Retroviruses (HTLV-IID from Patients with AIDS and at Risk for AIDS Serological Analysis of a Subgroup of Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-IID Associated with AIDS Antibodies Reactive with Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-I) in the Serum of Patients with ATIDS MikuLas PopPovic Laboratory of Tumor Cell Biology, National Cancer Institute, Bethesda, Maryland 20205 M. G. SARNGADHARAN Department of Cell Biology, Litton Bionetics, Inc., Kensington, Maryland 20895 Laboratory of Tumor Cell Biology, National Cancer Institute M. G. SARNGADHARAN Department of Cell Biology, Litton Bionetics, Inc., Kensington, Maryland 20895 MIKULAs PopPovic Laboratory of Tumor Cell Biology, National Cancer Institute, Berhesda, Maryland 20205 LiLiaN BRUCH Department of Cell Biology, Litton Bionetics, Inc. ¡OR PB Laboratory of Tumor Ce 'Ogy, National Cancer Institute March 1984; accepted 19 April 1984 — NON JORG SCHUPBACH MIxuLAs Popovic Laboratory of Tumor Cell Biology, National Cancer Institute, Bethesda, Maryland 20205 RAYMOND V. GILDEN MATTHEW A. GONDA Program Resources, Inc. NCEFFrederick Cancer Research Facility, Frederick, Maryland 21701 M. G. SARNGADHARAN Department of Cell Biology, itton Bionetics, Inc., ensington, Ma Laboratory of Tumor lo gy, ¡National Cancer Institute, SCIENCE, VOL. 224 ¡Bethesda, Maryland 20205 E =rúctura viral (cont) Membrana con proporción colesterol/lfosfolípidos 2.5 veces mayor respecto a membrana ce Contiene: - espículas virales (gp120/gp41) - B2 microglobulina - MHC ll a/B - Moléculas de adhesión (ICAM) - CD59, Factor H, otros inhibidores de complemento - Otras proteínas hospederas. Organización genética del VIH-1 pIT7MA p24CA p7NC gp120 gp41 Internal viral Envelope Glycoproteins Ro / env protease RT integrase HIW-1M SIV cuz HIV-1/0 SV esa HIV-2/A HIV-2/8 SiVwo SV svk SIV aca ri SIV acu Ver SIV ac Sab H Iv «e 11 | | | Receptores - Molécula CD4 Media la unión específica del viru Sin embargo, no es suficiente para m fusión de membranas necesaria pa internalización de la partícula - Co-receptores: Historia Identification of RANTES, MIP-10, and MIP-1f as the Major HIV-Suppressive Factors Produced by + CD8* T Cells Fiorenza Cocchi,* Anthony L. DeVico, Alfredo Garzino-Demo, Suresh K. Aryal Robert C. Gallo, + Paolo Lusso+ Evidence suggests that CD8* T lymphocytes are involved in the control of human im- munodeficiency virus (HIV) infection in vivo, either by cytolytic mechanisms or by the release of HIV-suppressive factors (HIV-SF). The chemokines RANTES, MIP-1a, and MIP-18 were identified as the major HIV-SF produced by CD8* T cells. Two active proteins purified from the culture supernatant of an immortalized CD8* T cell clone revealed sequence identity with human RANTES and MIP-1a. RANTES, MIP-1a, and MIP-1f8 were released by both immortalized and primary CD8* T cells. HIV-SF activity produced by these cells was completely blocked by a combination of neutralizing anti- bodies against RANTES, MIP-1a, and MIP-18. Recombinant human RANTES, MIP-1a, and MIP-1f induced a dose-dependent inhibition of different strains of HIW-1, HIV-2, and simian immunodeficiency virus (SIW). These data may have relevance for the prevention and therapy of AIDS. SCIENCE + WOL.270 + 15 DECEMBER 1995 3 HIV-1 p24 release (% of control) 3 5 KA g O RANTES AMP 0 mIP-1p e meP-1 g 3 a | P | | 05 5 50 500 Chemokine concentration (ng/mi) CC CKR>5: A RANTES, MIP-1a, MIP-1f Receptor as a Fusion Cofactor for Macrophage-Tropic HIV-1 Ghalib Alkhatib, Christophe Combadiere,* Christopher C. Broder,* Yu Feng,* Paul E. Kennedy,” Philip M. Murphy, t| Edward A. Bergert SCIENCE + VOL. 272 + 28 JUNE 1996 Vaccinia HIVenv, T7 pol Relative cell fusion CD4 ,CCR5, LacZ-T7 prom Tropism: Macrophage T cell line Gp120: Proteínas de la envoltura gp160=g p120+gp41 Glicoproteína externa Función unión a los receptores Muy glicosilada Muy variable (5 regiones variables y regiones constantes) Factor tóxico involucrado en patogénesis Silent Face Non—- Neutralizing Face Neutralizing Face Proteínas on función enzimáti Transcriptasa inversa Heterodímero p65/p51. Funciones: Actividad ADN polimerasa ARN dependiente Aactividad RNasa H ADN polimerasa ADN dependiente PINTO 0 Proteínas con función enzimática Proteínas con función enzimática Integrasa Proteína de 32kDa Función: — Principal componente del complejo de integración. Elimina dos nucleótidos del extremo 3" del ADN viral y establece un enlace fosfodiester entre este y el ADN celular. Proteínas reguladoras y auxiliares Nef: -— Proteína entre 25 y 34 kDa. - Función: Importante factor de i para el VIH. Los virus mutantes en esta proteína pos fenotipo atenuado. Regulación negativa de la expresión de en la célula infectada. Proteínas reguladoras y auxiliares - Proteína de 23 kDa - Función: Factor de la infectividad Mutantes Células permisivas NO Permisiv A *SupT1 % Linfocitos T prim % CEMss “HUT78 %293T “CEM **MT4 **H9 “MT2 Isolation of a human gene that inhibits HIV-1 infection and is suppressed by the viral Vif protein Ann M. Sheehy*, Nathan €. Gaddis*, Jonathan D. Choi; £ Michael H. Malim*: * Department of Microbiology; and + Division of Human Genetics, The Children's Hospital of Philadelphia; University of Pennsylvania School of Medicine, Philadelphia, Pennsylvania 19104, USA 4 Department of Infectious Diseases, Guys, Kings and St Thomas" School of Medicine, King's College London, London SEl 9RT, UK NATURE 14 JULY 2002 Hibridación Sustractiva de ADNc entre CEM y CEMss e a EJ wia type b [Emaye CEMISIHA — - e el 100 140 100 so d 120 Es E 53 100 po is Es 3 E ls s 0 ¿ ” , 5r 40 > 0 E a yrue 04171 0.33:1 11 , rs 0474 0391 1:1 0 e 0.171 0.331 11 Plaemid rado (CEMTS:proiruss Plasmka ratlo (54 75:provirus) Plaamid radio (2E%4475:prowinus) 7 =>, gg “> rl A y (e e tes Ñ = strand DNA -U—U—UC=—U— Ñ + strand DNA, “A—=A—AG=A= ABOBEC3G or * // ABOBEC3F APOBEC3G i APOBEC3G - nl Es El APOBECIG o Proyecto Inhibidores SIDA, Departamento de Bioinformática $ Proteínas reguladoras y auxiliares Vpu: Proteína integral de membrana de - Funciones: 1. Induce la degradación del CD4 2. Potencia el proceso de liberación del vir la membrana. 3. Neutralización de Thetherin - No se encuentra incorporada a los viriones. Gp41 y la fusión de membranas Attachment CD4 Binding Coreceptor Hairpin Formation and Binding mbrane Fusion - Less Specific - Cell Type Dependent - Makes infection more efficient - Highly Specific - Cell Type Independent - Required for Infection Ciclo replicativo3.swf Reverso T cripción del VIH 11) ¡RNA 3 Ratrovirel y Genomic RHA [2) (3) 14) [5) $5) par Raroviral DA E AL MEETS OT" PEA EN 7d on Cao ap A , Gyera FE (25 52A52— P-5582 Pus 52 TAR y Pa A Mela NEO E dy Anar E RNAPIS ¿NP pr o 3 II d ¿BE e ? sn HEY LTR eS o PIC promoter RINAPII assembly clearance pausing RNAPII elongation RNA binding and TROARRNRARRWREROR — LOLPPLERLTL Morfogénesis de los viriones Endoplasmic eliculum b v Virion Assembly v budding intermediate? Mpsia ao 4 Myristylation b a - á lo Si A Gag-Pol Q 4 = — ; Secretory UB Frap p6 late domain 0 =350 vesicle — E * p T1SG101 Nof e Inhibidores a lo replicativo del VIH ados para uso clínico BINDING T20, Maraviroc 7 A TRANSCRIPTION ON pus double stranded IN A AZT, ddl, ddC, d4T, 3TC, Emtricitabine, Abacavir, Tenofovir, Nevirapina, Delavirdina, Efavirenz y | Etravirina sb 97 44d cell ASSEM ganen brane RNA LG viral a TRANSLAT! A Saquinavir, Indinavir, Ritonavir, Nelfinavir, Amprenavir, Lopinavir, Atazanavir, Fosamprenavir, Tipranavir y Darunavir genomic RNA cell nucleus Raltegravir La TARVAE ha sido muy exitosa pero tiene limitacion 1. No elimina el VIH 2. Reacciones adversas considerab 3. Elevado costo. 4. Resistencia. ¿Qué se espera de los nuevos inhibidores? - Menor costo de producción - Mejor actividad específica - Menor toxicidad - Mejor biodistribución (tiempo de vida medi capacidad de atravesar la barrera hematoencefálica, etc) - Actividad frente a los mutantes que confieren resistencia a los NNRTI actuales La mayofía de los compuestos con capacidad inhibitoria no llegan á ser aprobados en clínica Transcriptasa Inversa o DRegistrados E Fase lll DrFase Il DrFase l m En estudios clínicos DEliminados despues de EC El Con actividad NNRTI reservorios virales? virales son los Ífagos. «e Los principales reservori linfocitos CD4+ de memoria y los m % Tratamiento con drogas que induzcan de los genes virales en combinación con posible eliminar esos reservorios virales. “Acido valproico.(Depakene) Epilepsia. Inhi histone deacetylase 1 (HDAC1) Activa la replicación del VIH in vitro Prueba de concepto con cuatro pacientes Reducc de los reservorios virales en 3. Fase ll en curso Hasta aquí la clase, gracias por su atención y como ven lo mejor es seguir usando esto... >