Baixe Princípios de Separação de Proteínas: Tipos e Aplicações e outras Resumos em PDF para Biologia, somente na Docsity! Princípio de separação: Horizontal – separação baseado na carga elétrica Vertical em gel - separação baseado na carga elétrica e massa relativa Vertical em gel com SDS - separação baseado na massa relativa Eletrofocalização – separação baseado na carga elétrica Separação de proteínas Proteína pI Mr A 4,2 80.000 B 5,0 50.000 C 6,5 100.000 D 8,0 150.000 E 5,0 70.000 Separação na horizontal – carga (pH 6,5) - + - - - O ++ - CD AB E pI = pH carga neutra pI < pH carga negativa pI > pH carga positiva Separação de proteínas Proteína pI Mr A 4,2 80.000 B 5,0 50.000 C 6,5 100.000 D 8,0 150.000 E 5,0 70.000 - Focalização isoelétrica (pH 4 a 10) - pI - + 10 9 8 7 6 5 4 - - - O ++ - 6,5 CD A B E Como seria a separação da amostra proteica abaixo usando um tampão de pH 8,5 ???? Proteína pI Mr A 8,0 (-) 80.000 B 5,6 (----) 50.000 C 7,0 (---) 90.000 D 7,4 (--) 50.000 E 8,0 (-) 100.000 a) Eletroforese em gel b) Eletroforese em gel com SDS - + - + B C D A E B D A C E A eletroforese de proteínas é um exame solicitado para avaliar as quantidades de cada uma das proteínas totais
Dosagem de proteínas totais de uma amostra
1,0 ml da amostra
4,0 ml do reagente de biureto
Esperar 10 minutos
Ler contra o Branco
Amostra
Conc. ?
Determinar a concentração de proteínas totais na amostra
recorrendo à curva padrão
0 2 4 6 8 10 mg/ml
Eletroforese de proteínas séricas
Tiras embebidas Gel de eletroforese
em tampão embebido em tampão O s2.58%
ms
a
8
24-44%
Ânodo Cátodo 6.1-10,1%
Eletroforese
8.5-14.5%
Coloração Densitometria 10:21%
Albumina Gj- G- P- y-Globulinas
Densitometria — quantificar as frações
BI00
ALB 01 & 8 Y
A B
14 A-O FEROGRAMA DEPOIS DE PRONTO. B- ASPECTO DA DENSITOMETRIA
DAS FRAÇÕES. A ÁREA SOB AS CURVAS MEDE A CONCENTRAÇÃO RELATIVA
DESSES COMPONENTES. O = origem
Amas y Pico M
Figura 1. Eletroforese sérica em gel de agarose. A: Perfil normal.
B: mieloma múltiplo
Soro Urina
Figura 2. Eletroforese em gel de agarose de paciente com mieloma
múltiplo
Componentes protéicos das cinco zonas da eletroforese de proteínas
Zonas Componentes Protéicos
Albumina Pré-albumina e Albumina
Alfa-1 Alfa-1 glicoproteína ácida, orosomucóide, alfa-i
antitripsina, alfa-lipoproteína
Alfa-2 Alfa-2 macroglobulina, haptoglobina, ceruloplasmina,
, alfa-1 antiquimotripsina, globulina insolúvel e pré-beta
Nipoproteína
Beta Transferrina, hemopexina, beta lipoproteína, IgA,
complemento C3
Gama IgM, IgG, proteína C reativa e fibrinogênio (visível
somente no plasma)
Proteína Concentraç ão g/dL Principais funções Patologias Albumina 3,5 e 5,0 Manter a pressão osmótica, controlar o pH no corpo; transportar hormônios da tireoide, hormônios lipossolúveis, bilirrubina, ácidos graxos livres e cálcio. desnutrição; hemorragias; queimaduras; enteropatias perdedoras de proteínas; síndrome nefrótica; gestação, edema. desidratação 1- globulina 0,2 a 0,4 1-gligoproteína (utilizada como marcador de infecção aguda); 1-antitripsina (responsável pela ação das enzimas lisossômicas); TBG (proteína carreadora de T3 e T4; RBP (proteína carreadora de vit A). deficiência de alfa-1-antitripsina Processo infeccioso e inflamatório agudo, neoplasia e traumatismo. 2- globulina 0,5 a 0,9 -Eritropoetina (proteína responsável pela produção de hemácias); - ceruloplasmina (transporta cobre no corpo); - macroglobulina (neutraliza enzimas proteolíticas). desnutrição; anemia megaloblástica; enteropatias perdedoras de proteínas; doenças severas do fígsado Processo infeccioso e inflamatório agudo, neoplasia e traumatismo. -globulina 0,6 a 1,1 São proteínas de fase aguda. C3, a transferrina (transporta o ferro do intestino para os tecidos) e hemopexina (carreadora do grupo heme). desnutrição proteica. cirrose biliar; Doença de Cushing; hipotireoidismo; anemia por deficiência de ferro; icterícia obstrutiva; gestação no 3º trimestre. -globulina 0,7 a 1,5 São as imunoglobulinas. Podem ser IgM, IgG, IgE, IgA. Conferem imunidade. agamaglobulinemia; amiloidose crônica; doenças granulomatosas; leucemia linfocítica crônica; cirrose; doença de Hodgkin; mieloma múltiplo; doenças do colágeno.
